期刊简介
本刊自创刊以来，面向国内外公开发行，为综合性中医药学术期刊，是天津市教委中文核心期刊。本刊注重实用性，编排规范，栏目新颖丰富多彩，全面报道中医中药教学、科研、临床领域的新技术，新成果，注重中医药学术水平，全面提高办刊质量。
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- 杂志名称：天津中医药大学学报杂志
- 主管单位：天津市教育委员会
- 主办单位：天津中医药大学
- 国际刊号：1673-9043
- 国内刊号：12-1391/R
- 出版周期：季刊
期刊荣誉：中国期刊全文数据库(CJFD)期刊收录：国家图书馆馆藏, 哥白尼索引(波兰), 上海图书馆馆藏, 知网收录(中), 万方收录(中), 维普收录(中), CA 化学文摘(美)
一种改良的5-羟色胺转运体活性化合物高内涵筛选方法
刘艳庭；应树松；武艺静；董鹏志；吴红华；徐砚通
关键词：5-羟色胺转运体, APP+, hSERT-HEK293细胞系, 高内涵筛选
摘要：[目的]建立一种改良的5-羟色胺转运体(SERT)活性化合物高内涵筛选(HCS)方法,包括构建稳定转染hSERT细胞株和优化SERT活性化合物HCS条件.[方法]应用聚乙烯亚胺(PEI)将质粒hSERT-pcDNA3转染人HEK293细胞,采用遗传霉素(G418)筛选获得稳定转染细胞系,以实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)和蛋白免疫印迹(Western blotting)方法分别从转录和翻译水平验证hSERT表达,采用SERT荧光底物4-(4-二甲氨基)苯基-1-甲基吡啶(APP+)在高内涵系统上验证SERT摄取功能并优化其检测条件,应用选择性SERT抑制剂Fluoxetine和SERT增强剂Tianeptine验证SERT HCS方法可靠性.[结果]经PEI转染和G418筛选获得了稳定转染hSERT-HEK293细胞株.与HEK293细胞相比,hSERT-HEK293细胞中hSERT mRNA和蛋白表达量均显著性增加,APP+摄取实验表明hSERT-HEK293细胞摄取ApP+显著性增加,并可被Fluoxetine特异性抑制.实验优化了高内涵检测APP+摄取实验中APP+浓度、孵育时间、数据分析方法等条件.Fluoxetine显著地抑制hSERT-HEK293对ApP+的摄取,Tianeptine显著地增强hSERT-HEK293对APP的摄取,证实此HCS方法的可靠性.[结论]本研究首次优化了应用APP+检测SERT活性的HCS条件,显著提高了SERT荧光检测方法灵敏度,并首次证实此HCS方法适用于SERT促进剂筛选,因此,建立了一种改良的SERT活性化合物HCS方法.
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