期刊简介
本刊自创刊以来，面向国内外公开发行，为综合性中医药学术期刊，是天津市教委中文核心期刊。本刊注重实用性，编排规范，栏目新颖丰富多彩，全面报道中医中药教学、科研、临床领域的新技术，新成果，注重中医药学术水平，全面提高办刊质量。
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- 杂志名称：天津中医药大学学报杂志
- 主管单位：天津市教育委员会
- 主办单位：天津中医药大学
- 国际刊号：1673-9043
- 国内刊号：12-1391/R
- 出版周期：季刊
期刊荣誉：中国期刊全文数据库(CJFD)期刊收录：国家图书馆馆藏, 哥白尼索引(波兰), 上海图书馆馆藏, 知网收录(中), 万方收录(中), 维普收录(中), CA 化学文摘(美)
以ADP受体P2Y12为靶标的中药抗栓活性无标记细胞表型筛选
谭晓文；董鹏志；宁召臣；朱彦
关键词：ADP受体, 无标记, 高通量
摘要：[目的]建立二磷酸腺苷（ADP）受体P2Y12的无标记方法以高通量、低毒性地筛选中药抗血小板/血栓活性物质。[方法]应用聚乙烯亚胺（PEI）将质粒pCMV-hP2Y12-C-His转染入HEK293细胞，采用遗传霉素（G418）筛选获得稳定转染的hP2Y12-C-His-HEK293细胞系，以实时荧光定量聚合酶链式反应（qRT-PCR）和蛋白免疫印迹（Western Blot）的方法，分别从转录和翻译水平验证P2Y12-His的表达，采用Lable-free Enspire多功能读板机检测激动剂ADP的激动作用，以及抑制剂替卡格雷的抑制作用，以确定筛选体系的可靠性，并利用该体系筛选中药活性组分及单体共30种。[结果]经PEI转染和G418筛选获得了P2Y12-His-HEK293稳转细胞株。qRT-PCR和Western Blot结果表明P2Y12-His mRNA和蛋白表达量均显著性增加。Lable-free Enspire多功能读板机检测实验表明P2Y12受体激动剂ADP,抑制剂替卡格雷,有显著的激动及抑制作用，且具有明显的量效关系。中药组分及单体筛选结果表明，有7种组分或单体对 P2Y12受体具有良好的抑制作用。[结论]本实验成功建立了ADP受体P2Y12 Lable-free Enspire多功能读板机的无标记高通量筛选。
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